Estudios han evidenciado la transmisión de microorganismos presentes en el cepillo dental por el inadecuado manejo causando enfermedades bucodentales, por lo que se considera importante estudiar la presencia de microorganismos en los cepillos dentales relacionados con enfermedades para promover conductas saludables. Para el estudio se recogieron los cepillos dentales utilizados por más de cuatro meses por niños de quinto año de la Escuela Fiscal Básica Leopoldo Freire, del Cantón Chambo, Provincia Chimborazo, los que fueron transportados individualmente en caldo de Soya y se cultivaron en Agar Sangre, Manitol Salado, Agar Eosina y Sabouraud, para posteriormente realizar la identificación por la tabla de Boquet. Se constatò la presencia de Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Enterobacter cloacae, Klebsiella pneumoniae, Proteus vulgaris, Proteus mirabilis, Streptococcus B-Hemolìtico grupo A, Citrobacter freundii, Enterobacter aerogenes y Citrobacter diversus, por lo que se concluyó que los cepillos dentales después de tres meses de uso contienen microorganismos patógenos que se relacionan con enfermedades como las caries, gingivitis, necrosis pulpar, abscesos, amigdalitis, faringitis, neumonía, influyendo el manejo y la falta de cambio oportuno del cepillo dental.